• 產品品牌： REAGEN
• 產品貨號： RND99131
• 產品規(guī)格： 48/96T
• 產品適用： 適用于利福平檢測
• 產地來源： 中國深圳
• 試劑盒組成： 檢測試劑、說明書
• 保質期： 12個月

本測試盒用競爭免疫分析法定量測定細胞培養(yǎng)液中的利福平。該測試盒反應孔可拆卸，可測單份樣品，也可測多份樣品。定量分析時需有含450nm波長的微孔板酶標儀。

1 概要

利福平（Rifampicin）一種廣譜抗生素藥物，對結核桿菌有較強抗菌作用，對革蘭氏陽性或陰性細菌、病毒等也有療效，主要用于治療結核病、腦膜炎和金黃色葡萄球菌感染，外用可治療沙眼等。

2 測定原理

本測試盒利用固相酶聯(lián)免疫吸附原理，采用間接競爭ELISA法進行測定。用抗原包被微孔板，加入利福平標準品或樣品、抗利福平酶標單克隆抗體進行免疫反應后，將未與包被抗原結合的抗體洗去；再加入酶標記的抗鼠IgG抗體孵育，加入顯色液，經終止液終止后，用酶標儀在450nm處測定OD值。

3 提供的物品

微孔板

6個濃度的標準溶液（各0.5mL）

標準1：0ng/mL ……………………………………………………………........直接使用

標準2：1.0ng/mL ………………………………………………………................直接使用

標準3：2.0ng/mL ……………………………………………………........…........直接使用

標準4：5.0ng/mL ……………………………………………………........…........直接使用

標準5：20.0ng/mL ………………………………………………………........直接使用

標準6：50.0ng/mL …………………………………………………….......….直接使用

抗體溶液(6mL) …………………………………………………………………直接使用

酶標物(12mL) …………………………………………………………………直接使用

顯色液(12mL) …………………………………………………………………直接使用

終止液(6mL) ………………………………………………………………………直接使用

10X濃縮洗液(30mL) ……………………………………………………………稀釋使用

4 盒中未提供，需自備物品

微孔板酶標儀（含450nm）、去離子水或蒸餾水。

5 操作者注意事項

終止液為0.5M硫酸，避免接觸皮膚。每次加樣后立即將所有試劑放回2~8 ℃。每步加樣時間應控制在5min內。孵育過程中應避光。不要使用過期試劑盒。不要交叉使用不同批號的試劑盒中的試劑。

6 儲存條件

保存試劑盒于2~8℃。不要冷凍

顯色液對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。

將不用的微孔板放進原鋁箔袋中，置2~8℃保存。

7 試劑變質的標志

標準1的吸光度值小于0.5個單位（A_450nm<0.5）時，表示試劑可能變質。

8 樣品處理 

----細胞培養(yǎng)液無需前處理，直接進行測定

9 酶免疫分析程序

----濃縮洗液為10倍濃縮液，使用時與去離子水或蒸餾水按體積比1:9稀釋后使用。

----取所需數(shù)量的板條插入微孔架，記錄樣品及標準的位置。

----加入50mL標準品或處理好的樣品到微孔，每個標準和樣品必須使用新的吸頭。

----加入50mL利福平單克隆抗體溶液到每個微孔中（注意移液器管尖不要接觸到孔中的液體，避免交叉污染），37℃孵育90min。

----甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板5次，最后一次應在吸水紙上拍打以完全除去孔中液體。

----每孔加入酶標物100mL，37℃孵育60min。

----甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板5次，最后一次應在吸水紙上拍打以完全除去孔中液體。

----每孔加入顯色液100mL，37℃孵育15 min。

----每孔加入終止液50mL，立即用酶標儀在波長450nm處測定吸光度值（OD值）。

10 樣品濃度計算

以標準溶液OD值與標準1的OD值的比值為縱坐標，所對應標準溶液濃度（ng/mL）的對數(shù)值為橫坐標，制作標準曲線。根據(jù)樣品OD值與標準1的OD的比值，可從曲線上得到對應點的橫坐標，即為利福平濃度的對數(shù)值，求得反對數(shù)即為測定液中利福平濃度C（ng/mL）

11 主要技術指標及參數(shù)

11.1  最低檢出濃度1.0 ng/mL。 

11.2  加標回收率在70-120%，條內變異系數(shù)＜10%，條件變異系數(shù)＜15%。